摘要：駱駝體內(nèi)存在天然的缺失輕鏈的重鏈抗體，克隆其可變區(qū)可以得到只有重鏈可變區(qū)組成的單域 抗體，稱為VHH( ariable domain of heavy chain of heavy chain antibody)，也稱為納米抗體( nanobody. a singl
駱駝體內(nèi)存在天然的缺失輕鏈的重鏈抗體，克隆其可變區(qū)可以得到只有重鏈可變區(qū)組成的單域 抗體，稱為VHH( ariable domain of heavy chain of heavy chain antibody)，也稱為納米抗體( nanobody. a single domain antibody)。普通的免疫球蛋白的基木結(jié)構(gòu)是分子量為150kDa的四聚體多肽，由兩對相同的重鏈(50kDa)和輕鏈(25kDa)多肽組成，二者由鏈間的二硫鍵鏈接。輕鏈由N端的可變區(qū)(VL)和C端的一個保守的區(qū)域(CL)構(gòu)成，重鏈由四個或五個結(jié)構(gòu)域組成N端的可變區(qū)(VH)，緊接著三至四個恒定的區(qū)域(CH1.CH2CH3可能CH4)。免疫球蛋白形成Y型或T型結(jié)構(gòu)，兩個抗原結(jié)合區(qū)域通過CH1及CH2間的柔性鉸鏈區(qū)連接在一起，連到負(fù)責(zé)起效應(yīng)的具有保守結(jié)構(gòu)的FC區(qū)域。在哺乳動物中這種免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)相對比較保守。
（駝可汗內(nèi)蒙古駱駝奶招商加盟代理） 圖1 VHH Fv scFv結(jié)構(gòu)圖 圖2 VHH缺少CH1域 抗體的FC區(qū)域由重鏈的CH2及CH3構(gòu)成，介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒效應(yīng)(ADCC)及補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒效應(yīng)(CDO.抗體的N端，配對的VH及VL形成抗體的抗原結(jié)合位點(FV)在輕、重鏈每個可變區(qū)中存在三個氨基酸長度及序列高度變異的區(qū)域，簡稱為CDR1，CDR2，CDR3，這三個區(qū)域被四個序列相對保守的骨架區(qū)分隔開(FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3，F(xiàn)R4)。輕重鏈高變區(qū)通過非共價結(jié)合聚集成簇，形成大的界面與抗原結(jié)合，也即為抗體決定簇。這些超變的區(qū)域折疊成一些經(jīng)典的loop結(jié)構(gòu)。重鏈可變區(qū)的CDR3在長度及氨基酸組成上多變，因此結(jié)構(gòu)也難預(yù)測駱駝科血清中有普通的IgG1及重鏈抗體lgG2(約10kDa)及l(fā)gG3(約12kDa)。
駝可汗內(nèi)蒙古駱駝奶招商加盟代理） 由于3端CH1外顯子處剪切信號的點突變導(dǎo)致的可變剪接，造成重鏈抗體缺少能與輕鏈結(jié)合的CH1區(qū)域。IgG1分為lgG1a鉸鏈區(qū)19個氨基酸)和IgG1b(鉸鏈區(qū)12個氨基酸)lgG2分為IgG2a(鉸鏈區(qū)35個氨基酸)IgG2b(鉸鏈區(qū)29個氨基酸lgG2c(鉸鏈區(qū)15個氨基酸)。lgG3鉸鏈區(qū)12個氨基酸)大約15kDa分子量小，但擁有完整的抗原結(jié)合位點。在序列上，脊椎動物中，普通抗體和納米抗體序列大部分相同，但存在五個保守位點氨基酸差異。Leu12Ser(即12位在VH中常為Leu而在VHH中此位常為Se)Val42he/lyr，Gly49Glu，Lu50Arg/ys，和Trp52Gy(不是常保守).VH中42.49.50.52這四個位點主要參與與VL作用，多為疏水的氨基酸，但在VAH中變成了親水的氨基酸，這種序列的改變增加了納米抗體的水溶性，減少了抗體的聚合性也直接導(dǎo)致了MHH不能夠結(jié)合輕鏈。
駝可汗內(nèi)蒙古駱駝奶招商加盟代理） 圖3 VH和VHH結(jié)構(gòu)差異 圖4 V-D-J重排產(chǎn)生VHH
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